Infection à rotavirus

L'infection à rotavirus ou la grippe intestinale / gastrique est une maladie infectieuse avec traitement symptomatique. L'infection à rotavirus est plus fréquente chez les enfants.

L'infection à rotavirus représente un danger particulier pour les enfants, car la plupart des infections se produisent dans cette population particulière.

Agent causal de l'infection à rotavirus

L’infection est causée par des rotavirus, des virus de la famille des Reoviridae dont la composition antigénique est semblable.

Source d'infection

La source d'infection est une personne malade. Le plus dangereux en termes de transmission de l'infection est le patient au cours des 3 à 5 premiers jours de manifestations cliniques de l'infection à rotavirus, car pendant cette période, le contenu en virus dans les selles excrétées est le plus important.

Mécanisme de transmission

Le mécanisme principal de transmission du virus est fécal-oral, moins souvent - la voie de propagation contact-ménage à travers le transfert du rotavirus avec des objets infectés. Les produits laitiers sont particulièrement dangereux à cet égard. Les basses températures ne détruisent généralement pas le virus. Par conséquent, le stockage des aliments dans le réfrigérateur n’empêche pas le développement d’une infection à rotavirus.

Période d'infection à rotavirus épidémique

Le foyer de la maladie survient en automne-hiver, mais il peut aussi y avoir des cas d’apparition des autres saisons. En règle générale, la propagation et l'apparition de symptômes caractéristiques de l'infection à rotavirus s'accompagnent de l'apparition d'une épidémie de grippe. Par conséquent, les personnes sont infectées par le rotavirus, plus communément appelé «grippe intestinale».

Pathogenèse

Après avoir pénétré dans le corps humain, le virus pénètre dans les cellules de la membrane muqueuse de l'intestin grêle, ce qui provoque la destruction des villosités de l'intestin. La synthèse d'enzymes spécifiques, ainsi que la violation de la fonction de sécrétion de la muqueuse intestinale, entraînent une diarrhée sévère et une déshydratation du corps en raison de la grande quantité d'électrolytes et d'eau pénétrant dans la lumière intestinale.

Symptômes de l'infection à rotavirus:

• congestion nasale;
• maux de gorge;
• toux
• douleur abdominale;
• nausée, vomissement, diarrhée;
• maux de tête, fièvre.

Clinique:

Les principales périodes d'infection à rotavirus:

• la période d'incubation dure 1-2 jours;
• période aiguë dure 3-7 jours;
• récupération, dure 4-5 jours.

La maladie se caractérise par un début aigu, mais la présence d'une période prodromique est possible (environ 2 jours). Peut causer des indispositions, une faiblesse générale, des maux de tête, une fatigue accrue, une perte d’appétit, des sensations désagréables et des grondements dans l’estomac. En outre, l'apparition de manifestations de la maladie au niveau des voies respiratoires supérieures est possible: congestion nasale, mal de gorge, toux facile.

Le tableau clinique global comprend les syndromes d'intoxication, de gastro-entérite et de lésions des voies respiratoires supérieures.

Les manifestations du syndrome de gastro-entérite comprennent: un grondement sourd dans l'abdomen, des douleurs surtout au sommet de l'abdomen, des nausées, des vomissements, de la diarrhée. La diarrhée avec infection à rotavirus a une consistance mousseuse aqueuse et est de couleur jaune ou jaune verdâtre.

Manifestations du syndrome d'intoxication: fatigue, faiblesse, mal de tête. Dans les cas graves: vertiges, évanouissements.

La défaite des voies respiratoires supérieures se caractérise par un nez qui coule, une congestion nasale, un mal de gorge, une toux. Zev quand il a une couleur rouge vif.

Complications et mortalité

Les formes sévères de la maladie, accompagnées d'une déshydratation sévère, sont caractérisées par le développement d'une insuffisance cardiovasculaire, voire de décès (dans 2-3% des cas). Après l'infection, une immunité instable se produit, qui s'affaiblit avec le temps, ce qui permet une réinfection.

Diagnostic de l'infection à rotavirus

Le diagnostic de l'infection à rotavirus n'est possible que lorsque le rotavirus est détecté chez l'homme à l'aide de méthodes de diagnostic de laboratoire telles que la PCR-réaction en chaîne par la polymérase, la réaction d'hémagglutination RPHA, la liaison CSC-complément, l'immunofluorescence, etc.

Une numération globulaire complète indique une leucocytose avec un décalage gauche neutrophilique, une augmentation de la RSE - dans la période aiguë. Pour la période de récupération est caractérisée par la normalisation de l'image de sang. L'analyse d'urine montrera de petites quantités de globules rouges, de globules hyalins et de protéines, de leucocytes et de protéines.

Infection à rotavirus - traitement de la grippe intestinale chez les adultes et les enfants

Le traitement est symptomatique, car il n'existe pas d'antirotavirus spécifique pour lutter contre le rotavirus.

Principes de traitement de l'infection à rotavirus:

1. Isolement d'un patient infecté par un rotavirus
2. Lutte contre la déshydratation. Pour cela, il est souhaitable d’utiliser des solutions salines spéciales, telles que le rehydron ou le sérum physiologique. Ils sont utilisés dans le traitement du patient à l'hôpital, mais une solution saline pour restaurer l'état acido-basique normal du corps peut être préparée à la maison: 1 cuillère à café pour 1 litre d'eau. Il est recommandé de boire beaucoup d'eau minérale.
3. La lutte contre la température doit commencer à une température de 38, 5 et plus. En même temps, selon le type de fièvre, il est nécessaire d’utiliser des méthodes physiques pour réduire la température, par exemple en frottant le corps avec de l’eau, et en prenant des médicaments spécifiques, il est préférable d’utiliser des bougies chez les enfants.
4. Acceptation des préparations enzymatiques, des agents adsorbants et astringents (charbon actif, polysorb), des préparations à base de bactéries lactiques.
5. Il est interdit de prendre des analgésiques pour des douleurs abdominales.

Indications de renvoi à l'hôpital pour infection à rotavirus:

• détérioration progressive, diarrhée prolongée;
• l'émergence de nouveaux symptômes.

Régime alimentaire pour infection à rotavirus:

Le régime alimentaire comprend d'éviter le lait et les produits laitiers, y compris les produits laitiers. Il est conseillé d’inclure dans le régime alimentaire du bouillon de poulet ou de la bouillie de riz cuite à l’eau sans ajouter d’huile. Il est nécessaire de manger en petites portions avec des pauses. Il est recommandé de limiter les apports alimentaires riches en glucides.

Prévention de l'infection à rotavirus

Les principales mesures préventives pour l'infection à rotavirus comprennent:

• Empêcher le virus de pénétrer dans le corps, notamment en isolant les malades, en se lavant les mains régulièrement, en mangeant des produits éprouvés et de grande qualité, en utilisant de l'eau distillée, en lavant les légumes et les fruits;
• contrôle sanitaire des installations de restauration et des produits dans les magasins, les marchés.

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Infection à rotavirus

L’infection à rotavirus (gastro-entérite à rotavirus) est une maladie infectieuse aiguë causée par des rotavirus, caractérisée par des symptômes d’intoxication générale et des lésions du tractus gastro-intestinal accompagnant le développement de la gastro-entérite.

Code CIM-10
A08.0. Entérite à rotavirus.

Étiologie (causes) de l'infection à rotavirus

L'agent en cause est un membre de la famille Reoviridae, un genre de rotavirus (rotavirus). Le nom est basé sur la similarité morphologique des rotavirus avec une roue (du latin "rota" - "roue"). Au microscope électronique, les particules virales ressemblent à des roues avec un moyeu large, des rayons courts et une fine jante clairement définie. Un virion de rotavirus de 65–75 nm de diamètre est composé d’un centre (noyau) dense aux électrons et de deux couches de peptides: une capside externe et une capside interne. Le noyau de 38 à 40 nm contient des protéines internes et du matériel génétique représenté par l'ARN double brin. Le génome des rotavirus chez l'homme et chez l'animal comprend 11 fragments, ce qui explique probablement la diversité antigénique des rotavirus. La réplication des rotavirus dans le corps humain se produit exclusivement dans les cellules épithéliales de l'intestin grêle.

Infection à rotavirus, vue au microscope électronique

Quatre antigènes principaux ont été trouvés dans le rotavirus; le principal est l’antigène du groupe, la protéine de la capside interne. En tenant compte de tous les antigènes spécifiques à un groupe, les rotavirus sont divisés en sept groupes: A, B, C, D, E, F, G. La plupart des rotavirus humains et animaux appartiennent au groupe A, dans lequel les sous-groupes (I et II) et les sérotypes sont distingués. Le sous-groupe II comprend jusqu'à 70 à 80% des souches isolées chez des patients. Il existe des preuves d'une possible corrélation de certains sérotypes avec la sévérité de la diarrhée.

Les rotavirus sont résistants aux facteurs environnementaux: dans l'eau potable, les plans d'eau ouverts et les eaux usées, ils persistent jusqu'à plusieurs mois, de 25 à 30 jours pour les légumes, de 15 à 45 jours pour le coton et la laine. Les rotavirus ne sont pas détruits par la congélation répétée sous l'action de solutions désinfectantes, d'éther, de chloroforme, d'ultrasons, mais meurent à ébullition, sont traités avec des solutions d'un pH supérieur à 10 ou inférieur à 2. Conditions optimales pour les virus: température de 4 ° C et élevée (> 90%) ou faible (Auteur: Maladies infectieuses: leadership national, édité par ND Yuschuk, Yu. Ya. Vengerov. 2009

Le diagnostic d'infection à rotavirus

Affirmer
Chef adjoint
Chef épidémiologique
Département du Ministère de la Santé de l'URSS
G.G.NONISHCHENKO

7 mars 1989 N 15-6 / 6

Infection à rotavirus

(RECOMMANDATIONS METHODES)

Institut de poliomyélite et d'encéphalite virale, Académie des sciences médicales de l'URSS.

Institut de recherche en épidémiologie du ministère de la Santé de l'URSS;

Institut de recherche en épidémiologie et microbiologie. G.N. Gabrievskogo Ministère de la Santé de la RSFSR;

Association de production scientifique "Rostepidkompleks";

Institut de recherche scientifique interinstitutions sur la désinfection et la stérilisation du ministère de la Santé de l'URSS.

Les lignes directrices sont destinées aux praticiens et aux chercheurs des autorités sanitaires et des institutions.

Le rotavirus humain appartient à un groupe de virus animaux similaires, qui comprend, en plus, le virus de la diarrhée du veau du Nebraska (NCDV), le virus de la diarrhée épizootique des jeunes souris (EDJM), le virus du singe (SA-II), le virus provenant du contenu intestinal du mouton et du bovins (0), ainsi que des agents pathogènes des porcs, poulains, chiots et autres animaux souffrant de diarrhée. Tous ces virus ont la même taille et la même forme et sont proches les uns des autres en termes antigéniques.

Les animaux à rotavirus se reproduisent bien en culture tissulaire. Ils ont donc été isolés et étudiés avant le rotavirus humain. Les rotavirus des veaux et des singes, en raison de leur proximité antigénique au rotavirus humain, ont été utilisés pour établir son rôle étiologique dans la gastro-entérite aiguë et ont été utilisés jusqu'à présent dans leurs diagnostics sérologiques et pour l'obtention d'immuno-agents.

Le rotavirus humain a été détecté par microscopie électronique dans des cellules de l'épithélium duodénal et dans des extraits de selles de patients typiques, où il est souvent contenu à des concentrations très importantes (jusqu'à 10 particules dans 1,0 g de fèces). Rotavirus virion est une particule sphérique de diamètre compris entre 70 et 75 nm recouverte d’acide ribonucléique - ARN (11 segments bicaténaires), présente une densité flottante en chlorure de césium de 1,36 g / cu. cm avec coefficient de sédimentation 500 - 530 S

Selon les caractéristiques disponibles, le rotavirus humain, ainsi que les virus animaux énumérés ci-dessus, a été classé dans le genre Rotavirus de la famille Reoviridae. Le nom "rotavirus" est dérivé du latin rota - une roue à laquelle une particule de virus ressemble dans les préparations au microscope électronique.

Selon la spécificité antigénique, détectée par ELISA, les rotavirus sont divisés en deux sous-groupes (désignés par des chiffres romains - I et II) et par spécificité, détectés dans la réaction de neutralisation, par 4 (et éventuellement davantage) sérotypes (désignés par des chiffres arabes - 1). 2, 3, 4). La spécificité de sous-groupe de certains rotavirus est déterminée par la protéine principale de la capside interne et leur spécificité sérotypique est déterminée par la glycoprotéine de la capside externe. Des rotavirus d'un nouveau type (appelés pararotavirus) qui ne possèdent pas d'antigène spécifique à un groupe ont été récemment découverts.

L’infection à rotavirus est très répandue. Des informations sur son identification ont été publiées en Australie, en Grande-Bretagne, en RDA, au Canada, en Inde, en Espagne, aux États-Unis, en France, au Japon et dans de nombreux autres pays. En Union soviétique, des maladies liées à la gastro-entérite à rotavirus ont été enregistrées chez des enfants et des adultes dans plusieurs régions de la RSFSR, de la Transcaucasie, de l'Ukraine, des États baltes, de l'Asie centrale et d'autres territoires. Chez les enfants et les adultes, l’infection à rotavirus peut se manifester sous la forme de cas sporadiques, de maladies du groupe local et d’épidémies de masse, couvrant divers groupes de la population sur de vastes zones. Parmi les patients hospitalisés atteints d'infections intestinales aiguës, la proportion d'adultes atteints de gastro-entérite à rotavirus est en moyenne de 10 à 15%, les enfants de 15 à 27% ou plus. Les données de la littérature sur l'isolement du rotavirus (antigène) chez les enfants et les adultes en bonne santé sont très contradictoires: de 0–0,5 à 42% chez les enfants et de 0% à 7% ou plus chez les adultes. L’infection à rotavirus est enregistrée tout au long de l’année. Cependant, plus de 70% des patients sont détectés pendant la saison froide. Au cours de la période hiver-printemps, la majorité des épidémies d’infection à rotavirus parmi la population, ainsi que des maladies de groupe chez les nouveau-nés et les prématurés, les enfants de groupes organisés, les personnes âgées, sont également enregistrées. Il n'y avait pas de différence marquée dans la répartition des infections à rotavirus (enfants et adultes) en fonction du sexe.

L’infection dans les infections intestinales aiguës à rotavirus est due à des adultes et à des enfants infectés - à des patients présentant une forme manifeste d’infection ou à des rotavirus à sécrétions asymptomatiques avec selles. Parallèlement, les enfants de la première année de vie sont souvent infectés par des mères infectées par le rotavirus, les enfants plus âgés et les adultes par des enfants de groupes d’enfants organisés. L’infection d’êtres humains à partir d’animaux n’est pas prouvée, bien que sa possibilité ne soit pas exclue. Actuellement, des rotavirus de différents sérotypes se retrouvent dans les excréments de près de 50 espèces d'animaux et d'oiseaux présentant des signes prononcés de diarrhée et sans eux.

Les rotavirus chez les patients et les personnes ne présentant pas de manifestations cliniques de la maladie ne se trouvent actuellement que dans les matières fécales. Les patients sécrètent des rotavirus dans l'environnement dès le premier jour de la maladie, tandis que chez tous les patients, la quantité maximale de pathogènes dans les matières fécales (jusqu'à 10 à 10 particules virales par 1 g) a été détectée au cours des cinq premiers jours de la maladie, ce qui détermine le risque épidémiologique le plus élevé entre patients cette période de maladie. Au cours des 6 à 10 prochains jours, la libération de rotavirus avec les matières fécales des patients diminue brusquement à mesure que les selles se normalisent. La durée moyenne d'excrétion des rotavirus par les patients est de 7 à 8 jours, mais chez certains patients, cette période peut durer jusqu'à 20 à 30 jours. Les personnes sans manifestations cliniques de la maladie peuvent libérer à long terme des rotavirus contenant des matières fécales - plusieurs mois ou plus (période d'observation).

Le mécanisme principal de transmission des rotavirus est fécal-oral, qui est réalisé par les voies de transmission de l'eau, des aliments et domestique. En cas de maladies sporadiques et locales, l’infection à rotavirus se fait principalement par le biais du ménage. Cela contribue à une très faible dose de rotavirus pathogène (moins de 10 particules virales). Il a été établi que sur différents sites environnementaux, les rotavirus conservent leur viabilité de 10 à 15 jours (selon la température et l'humidité) à un mois; dans les matières fécales de plusieurs semaines à sept mois.

Actuellement, des épidémies d’infection à rotavirus dans l’eau et dans les aliments sont enregistrées dans notre pays et à l’étranger. Les rotavirus sont présents dans l'eau des rivières, des lacs, des mers, des eaux souterraines, de l'eau du robinet et de certains produits alimentaires (lait, etc.).

La possibilité de mise en œuvre dans certains cas de goutte à goutte, de poussière et d'autres voies du rotavirus est présumable.

Les rotavirus sont également connus comme l’un des principaux agents étiologiques dans les épidémies nosocominales (nosocomiales) de gastro-entérite aiguë. Dans des hôpitaux de profils différents, jusqu'à 50 à 60% des enfants malades peuvent être infectés. Il y a des cas d'épidémies dans les maternités. Affecte souvent les enfants sous alimentation artificielle, souffrant de maladies aiguës et chroniques, présentant divers types de déficit immunitaire.

Immunité de susceptibilité. Les personnes de tous les groupes d'âge sont sensibles au rotavirus. La plus grande sensibilité est observée chez les enfants âgés de 6 mois. jusqu'à 2 ans. Les anticorps anti-rotavirus sont détectés chez 50 à 60% des enfants de moins de 3 ans - plus de 90% et chez presque tous les adultes. Toutefois, selon la littérature, la présence d'anticorps dans le sérum indique essentiellement une simple association du rotavirus du corps humain, et non la présence d'immunité, car même avec un niveau significatif d'anticorps humoraux, des maladies répétées sont possibles. L'immunité contre l'infection à rotavirus n'est pas entièrement comprise. La résistance à l'infection serait principalement due à l'immunité locale des cellules de l'épithélium de l'intestin grêle, associée à la présence d'anticorps sécréteurs de la classe des IgA. Ces anticorps se retrouvent également dans le lait d'une mère allaitante et jouent apparemment un rôle dans l'immunisation passive des nouveau-nés qui, en l'absence de manifestations cliniques de la maladie contenant des matières fécales, peuvent libérer d'importantes quantités de rotavirus dans l'environnement et infecter les bébés prématurés et les enfants présentant des antécédents défavorables de prémorbide. Les rotavirus de différents sérotypes ne créent pas d'immunité croisée et, par conséquent, un même enfant ou un même adulte peut avoir des maladies répétées dues à d'autres sérotypes du virus. La nature instable de l’immunité chez les patients atteints de gastro-entérite à rotavirus est également notée; des maladies répétées sont souvent enregistrées 1 à 1,5 ans après l’infection.

Caractéristiques du processus épidémique d'infection à rotavirus:

- l'omniprésence de la distribution territoriale;

- saisonnalité hivernale ou hivernale sévère;

- faible dose infectieuse de l'agent pathogène et foyers élevés dans les groupes organisés;

- dommages causés à des personnes de tous âges;

- une proportion élevée de cas chez les enfants de moins de 2 ans présentant le maximum de détection de maladies chez les enfants de la seconde moitié de la vie;

- forte activité de l'eau et voies de transmission domestiques;

- localité des foyers, principalement limitée à la famille;

- la possibilité d'isolement asymptomatique des rotavirus chez les enfants et les adultes;

- la possibilité d'infection nosocomiale avec la participation du personnel médical et des parents d'enfants malades.

Le tableau clinique de l’infection à rotavirus a beaucoup en commun avec les manifestations cliniques de maladies intestinales aiguës d’étiologie différente, ce qui rend difficile le diagnostic de cette maladie. Cependant, un certain nombre de différences caractéristiques permettent de suspecter cette maladie en temps voulu et de mettre en œuvre correctement les mesures anti-épidémiques et thérapeutiques.

La période d'incubation est courte et dure de 15 heures à 3 - 5 jours, mais le plus souvent - 1 à 3 jours.

La plupart des patients présentent un début aigu de la maladie, lorsque tout le complexe de symptômes se développe au cours des premiers jours de la maladie. Chez les jeunes enfants, une survenue subaiguë est possible, caractérisée par l’apparition dans les premiers jours de la maladie de 1 ou 2 symptômes et par l’ajout du reste de 2 à 3 jours de maladie. Le plus pathognomonique de l’infection à rotavirus est l’atteinte du tractus gastro-intestinal, qui, chez 60 à 70% des patients, est associée à l’apparition de symptômes de lésions des voies respiratoires. Parfois, les symptômes catarrhaux peuvent précéder 3 à 4 jours de dysfonctionnement intestinal. Le syndrome respiratoire se caractérise par une hyperhémie modérée et une agglomération du pharynx, des arcs palatins et palatins, une congestion nasale, une toux qui, contrairement aux ARVI, sont moins prononcées, n'ont pas tendance à augmenter et sont de courte durée (4 à 5 jours). La diarrhée survient chez 95 à 97% des patients. Pour l'infection à rotavirus est caractérisé par le développement de la gastro-entérite, moins d'entérite. La chaise est généralement liquide, aqueuse, mousseuse, de mauvaise couleur, sans impuretés ou avec une petite quantité de mucus. Chez les jeunes enfants, la diarrhée aqueuse prédomine, ce qui explique le développement plus fréquent d'exsicose dans ce groupe d'âge. La fréquence moyenne des selles ne dépasse pas 4 à 5 fois par jour, mais peut atteindre 15 à 20 fois chez les jeunes enfants. La durée de la diarrhée chez les adultes et les enfants plus âgés est de 3 à 7 jours; chez les nourrissons, elle dure souvent jusqu'à 10 à 14 jours. Le vomissement est un symptôme cardinal et est observé chez 80% des patients infectés par le rotavirus. Le plus souvent, il survient en même temps que la diarrhée ou le précède. Les vomissements sont souvent répétés, mais à court terme (1 à 2 jours). Les vomissements répétés et incontrôlables de cette infection ne sont pas typiques et indiquent souvent une infection mixte. En règle générale, la température ne dépasse pas 38,5 - 39 ° C et est normalisée après 3-4 jours de maladie. Les signes les plus typiques d’intoxication générale sont la faiblesse, la léthargie, la faiblesse, les maux de tête et les vertiges. La gravité de la maladie est déterminée par le développement de l'exsicose isotonique, degré I - II, moins souvent degré III, plus fréquente chez le nourrisson. Dans le même temps, les pertes en électrolytes (Na et K) sont faibles, ce qui doit être pris en compte lors du traitement de réhydratation.

4. Diagnostic et diagnostic différentiel

Un examen objectif chez les patients a noté une léthargie, une hyperémie conjonctivale et une injection vasculaire de la sclérotique. Langue moyennement enduite, sèche. L'abdomen est mou, modérément douloureux à la palpation dans la région de l'intestin grêle. Le foie et la rate ne sont pas hypertrophiés. Côlon aveugle et sigmoïde doux, sans douleur. La pression artérielle est réduite. Le pouls n'est pas congestionné, mais il y a plutôt une tendance à une bradycardie relative. Il n'y a pas de phénomènes méningés. Une leucocytose modérée peut survenir au tout début de la maladie dans le sang périphérique. Elle a tendance à la leucopénie avec une diminution du nombre de piqûres leucocytaires et une augmentation du nombre de lymphocytes et de monocytes. La RSE n'est pas accélérée.

Dans les analyses d'urine en laboratoire, il existe une légère albuminurie, une microhématurie qui passe rapidement, une légère augmentation du nombre de leucocytes et l'apparition de cylindres hyalins. Les changements dans l'urine sont en fonction de la gravité de la maladie et de la déshydratation.

Examen microscopique des matières fécales, le nombre de leucocytes ne dépasse pas 10 - 15 dans le champ de vision, il existe un mélange de mucus.

Rectoromanoscopiquement, il est possible de révéler une hyperémie modérée de la membrane muqueuse du rectum et du côlon sigmoïde sans modification focale.

La sévérité de la gastro-entérite à rotavirus est déterminée par l'intensité de la diarrhée et la déshydratation qu'elle provoque, ainsi que par la gravité de l'intoxication générale. Il existe trois degrés de gravité de la gastro-entérite à rotavirus: légère, modérément forte et moins souvent grave.

Le diagnostic différentiel est réalisé avec la salmonellose, le choléra, la dysenterie, les infections à toxicité d'origine alimentaire causées par des micro-organismes pathogènes, la persiniose et d'autres gastro-entérites virales.

La forme gastro-intestinale de la salmonellose est caractérisée par la maladie simultanée de personnes qui mangent des produits de mauvaise qualité. Apparition généralement aiguë: hyperthermie, frissons graves, vomissements, douleurs abdominales intenses, selles fétides abondantes qui conservent leur caractère fécal, leucocytose neutrophilique avec déplacement de la formule leucocytaire vers la gauche. En cas de salmonellose, il n’ya pas de modification de la membrane muqueuse du pharynx, le foie est généralement hypertrophié. L’isolement de l’agent pathogène lors de l’examen bactériologique des matières fécales, des vomissures ou du lavage gastrique résout le diagnostic.

Selon de nombreux signes cliniques de masse et de rapidité de la maladie, la gastro-entérite à rotavirus peut ressembler au choléra. Cependant, l’infection à rotavirus se distingue par une évolution moins sévère, et en particulier par le fait qu’elle ne développe pas la condition d’algide, ainsi que par la présence de modifications typiques de la membrane muqueuse de l’oropharynx.

Les plus importants sont les résultats de la recherche bactériologique dans le cas de la détection de Vibrio cholerae. Une situation similaire se produit avec une infection à NAG.

La dysenterie bactérienne est caractérisée par une douleur abdominale aiguë, des envies fréquentes, parfois fausses, des selles mélangées avec du mucus et du sang, une sigmoïdite marquée, une réaction fébrile constante, des modifications pathologiques de la section distale du côlon selon la rectoscopie. Tous ces signes, ainsi que les résultats des recherches bactériologiques, facilitent relativement le diagnostic différentiel de la dysenterie sous forme de colite. Avec la dysenterie sous forme gastroentérique, la valeur des résultats des examens bactériologiques augmente considérablement.

Les diagnostics différentiels des gastro-entérites à rotavirus et des toxico-infections d'origine alimentaire causées par des agents pathogènes opportunistes sont particulièrement difficiles, étant donné la connaissance insuffisante du tableau clinique de ces maladies. En fonction de l'importance diagnostique des études de laboratoire, il convient de privilégier les résultats des études virologiques et immunologiques confirmant la nature rotavirus de la maladie, plutôt que la détection de bactéries pathogènes dans les selles du patient.

Pour la forme gastro-intestinale de la périniose, un début plus graduel est caractéristique, avec la présence, en même temps que la gastro-entérite, de douleurs dans les muscles et les articulations; le foie est généralement élargi; les selles sont visqueuses en raison d'un important mélange de mucus, et parfois du sang est possible. La leucocytose est notée dans le sang; ESR a augmenté.

Le syndrome de gastro-entérite peut être prédominant dans certaines maladies virales. Ceux-ci incluent l'infection adénovirale, qui, en plus des lésions intestinales, est caractérisée par une conjonctivite, une rhinite, une pharyngite, une amygdalite, une bronchite, une pneumonie, une augmentation des ganglions lymphatiques cervicaux, du foie, de la rate et une fièvre prolongée.

Des entérites et des gastro-entérites causées par les entérovirus de Koksaki et ECHO, les gastro-entérites à rotavirus se caractérisent par un tableau clinique monosyndromique dans lequel les lésions intestinales prennent la première place. En revanche, lors d'épidémies à caractère entérovirus, on note la présence de différentes formes cliniques de la maladie, la "multiformité" du tableau clinique, dans laquelle les symptômes de lésions des membranes du cerveau, de la peau et des voies respiratoires supérieures peuvent jouer un rôle important.

Le diagnostic différentiel de l'infection à rotavirus par la colibacillose chez l'enfant est très difficile et peut être basé sur les critères suivants:

- apparition plus aiguë d'infection à rotavirus par rapport à la colibacillose, notamment causée par une colibacillose entéropathogène;

- récupération plus rapide de l'infection à rotavirus, même chez les jeunes enfants;

- fréquence plus élevée de syndrome respiratoire en cas d’infection à rotavirus, mais sa gravité et sa durée sont moindres.

La principale difficulté réside dans le diagnostic d'infections mixtes à rotavirus et bactériennes, dont la proportion est relativement importante en hiver (7 à 10% de l'ensemble des infections à OKI).

La clinique des infections mixtes se caractérise par la présence de complexes symptomatiques caractéristiques des deux infections combinées: augmentation des symptômes d'intoxication, apparition de signes de modifications inflammatoires de la membrane muqueuse de l'intestin grêle et du gros intestin et récupération plus lente.

L’hospitalisation d’enfants et d’adultes chez lesquels un rotavirus est suspecté d’être atteint d’OCI est réalisée en fonction des indications cliniques (gravité de la maladie) et épidémiologiques (présence d’enfants faibles dans l’environnement du patient, enfants de la première année de vie, enfants en âge préscolaire, travailleurs de l’industrie alimentaire et assimilés incapacité de respecter le régime anti-épidémique à la maison, etc.). Les enfants de moins d'un an présentant des symptômes OCI sévères sont d'abord hospitalisés. L'hospitalisation séparée des patients suspectés de gastro-entérite à rotavirus et d'infections intestinales aiguës d'étiologie différente (salles séparées, boîtes) est obligatoire. Le principe du «remplissage ponctuel» des chambres (boîtes) doit être respecté.

Le traitement des patients atteints de gastro-entérite à rotavirus, en tenant compte des idées existantes sur la pathogenèse de cette maladie, comprend un régime d'épargne et une compensation des violations de l'état fonctionnel de l'intestin, la restauration de l'équilibre hydroélectrolytique et la détoxification du corps.

Au moment de la période aiguë de la maladie, un régime 4-B est prescrit, dans lequel il existe une forte restriction en glucides (jusqu'à 200 g) et une augmentation de la quantité de protéines (jusqu'à 150 g) avec une légère diminution du nombre de calories (2400 calories). La quantité de sucre est limitée à 40 g par jour, fruits et légumes. Le lait est exclu. Le sel n'est pas limité.

Le but de préparations multienzyme digestives domestiques telles que oraz, solizim, somilase, qui, dans le traitement des patients atteints de gastro-entérite à rotavirus, n’est pas inférieure à l’importation (panzinorm, digestif, festif, trienzyme, etc.), est indiqué.

Le degré de déshydratation de l'organisme est nécessairement évalué et une thérapie visant à reconstituer les pertes excessives d'eau et de sels est réalisée. Lorsque la déshydratation est I - II degré selon V.I. Des solutions de glucose et d'électrolytes sont administrées par voie orale à Pokrovsky (rehydron glucosolan), en tenant compte de la perte de liquides et d'électrolytes, et lors de la déshydratation du degré III, il est nécessaire de commencer le traitement par voie intraveineuse de solutions de sel et d'eau (trisol, quartosol, chlorosol, acésol), etc.

La tactique d'introduction des solutions est réalisée conformément aux principes de la thérapie de réhydratation.

Afin de stabiliser la circulation sanguine normale et la désintoxication, vous pouvez entrer dans des solutions colloïdales (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Il faut souligner que la prescription d'antibactériens, en l'absence d'infection bactérienne concomitante, n'est pas justifiée.

Il est conseillé d'utiliser des médicaments adsorbants et astringents.

Le traitement de l'infection virale n'est pas développé actuellement.

L'extrait de convalescent est réalisé après une normalisation stable (dans les 2-3 jours) des selles et la disparition de tous les autres symptômes cliniques de la maladie sous-jacente en l'absence de complications.

Les enfants fréquentant des établissements préscolaires, les travailleurs des établissements alimentaires et les personnes assimilées à ces centres subissent un examen virologique unique après la disparition des symptômes cliniques.

Les autres contingents de patients ne sont pas soumis à un examen de laboratoire obligatoire.

6. Diagnostic de laboratoire

Le diagnostic en laboratoire de la gastro-entérite à rotavirus n’est actuellement pas difficile. Le développement rapide du syndrome clinique et le séjour à court terme dans les hôpitaux rendent nécessaire l’utilisation de méthodes rapides pour déterminer l’étiologie de la maladie. La plupart des méthodes de diagnostic de laboratoire recommandées dans ce manuel vous permettent de détecter les rotavirus le premier jour. Le choix de la méthode dans chaque cas est déterminé par l'équipement technique du laboratoire, ainsi que par la disponibilité des réactifs appropriés.

Les méthodes traditionnelles de détection des modifications sérologiques dans les sérums de patients (réaction de neutralisation, inhibition de l'hémagglutination et fixation du complément) sont importantes pour l'analyse rétrospective de la maladie. Par conséquent, pour le diagnostic sérologique précoce de l'infection à rotavirus, la détermination des anticorps de classe IgM est recommandée.

L'objet de l'étude virologique d'un malade est généralement les matières fécales. La présence et la distribution de rotavirus dans l'environnement sont détectées en examinant des échantillons de sol, de nourriture et d'eau (eaux usées, eau de réservoirs naturels et artificiels, eau de boisson).

6.1. Détection de rotavirus dans le matériel clinique

et dans des échantillons environnementaux

6.1.1. Préparation des échantillons pour les tests; échantillonnage

Lors du prélèvement d'échantillons pour la recherche virologique, certaines exigences générales sont remplies, en prenant des mesures pour protéger le matériel de la contamination. Les échantillons ne sont prélevés que dans des plats stériles munis d'un bouchon en caoutchouc dense et d'un pansement adhésif renforcé. Transporter les échantillons dans des conteneurs contenant de la glace ou du réfrigérant.

6.1.2. Préparation de la suspension, clarification,

nettoyage des échantillons, élimination de la flore bactérienne

La préparation d'échantillons de matières fécales pour une étude sur les rotavirus comprend la préparation d'une suspension à 10%, l'homogénéisation, la centrifugation à 3000 tr / min. dans les 30 minutes pour éliminer la flore bactérienne. Lors de l'examen d'objets de l'environnement et de produits alimentaires, une pré-concentration du matériau étudié est effectuée.

6.1.3. Concentration de particules virales dans des échantillons d'eau

La concentration de rotavirus est une condition importante pour accroître l'efficacité de leur détection dans les masses d'eau de l'environnement.

La méthode de concentration des rotavirus par chromatographie d’adsorption sur silice poreuse - verre macroporeux (MPS) - est simple et pratique, avec des volumes d’eau de 0,1 à 10 litres. Lorsqu'un échantillon traverse une couche de MPS, le virus est adsorbé à la surface du verre. Pour l'élution du virus en utilisant des solutions capables de provoquer la désorption du virus. Le virus est éliminé du verre avec un petit volume de solution, ce qui conduit à une concentration de dizaines à des centaines de fois par rapport à l'échantillon d'origine.

Pour améliorer les propriétés d'adsorption, les préparations domestiques de verre de marque MPS-1000 VGH sont traitées comme suit: un mélange (1: 1) de 3% de H 0 et de HCl 6 M est préparé. Le verre préparé est rempli du mélange préparé à raison de 1 volume de verre pour 2 volumes du mélange. Faire bouillir dans une hotte (sans bouchon) pendant 1 heure en respectant les consignes de sécurité. Laver à pH neutre avec de l'eau distillée. Sec à 100 ° C

Colonne de verre, pré-traitée au fluide de silicone, remplie de verre (2 - 3 cm 3), trempée dans de l’eau distillée. A l’échantillon test (3 l), ajoutez une solution 1 M de MgCl à une concentration finale de 0,05 M. On fait passer de l’eau dans la colonne à une vitesse de 150 à 500 ml / heure, en ajustant le débit à l’aide de clips. Passer à travers la colonne 10 ml d'une solution d'élution: extrait de viande 3%, pH 9,0; ou bouillon de phosphate de tryptose 1%, pH 9,0; ou Tris HCl 0,1 M, contenant 2 M de NaCl, pH 11,0 (les solutions sont énumérées par ordre décroissant de leurs propriétés d'élution). Sorber les fractions avec un volume de 1 ml, le pH dans les fractions est amené à une valeur neutre.

6.2. Détection de particules virales par microscopie électronique (EM) et par microscopie immunoélectronique (IEM)

Le contenu des particules de rotavirus dans les fèces de patients typiques étant généralement élevé au cours des deux à 3 premiers jours de maladie, la méthode EM est largement utilisée pour détecter le rotavirus, ce qui peut être utilisé pour détecter des particules de rotavirus sans concentration supplémentaire de la suspension fécale.

Pour la préparation des médicaments, une goutte de la suspension à 10% étudiée est appliquée sur une plaque de cire dentaire ou de papier ciré. Sur une goutte du film-substrat vers le bas, imposer une grille de microscopie électronique sujet. Après 1 - 3 minutes la grille est lavée sur une goutte d'eau distillée et une solution de contraste (solution à 2% d'acide phosphorotungtique, ajustée à pH 6,5 - 6,6 avec 1 NKOH), dont l'excès après 30 - 40 secondes. retirez le papier filtre et le maillage est séché. La visualisation des préparations est réalisée au microscope électronique avec un grossissement instrumental de 30 - 50000x.

Les rotavirus sont assez facilement détectés par l'examen EM de suspensions fécales de tailles et de morphologies caractéristiques de particules virales. Les rotavirus doivent être différenciés de diverses particules virales et formations analogues à des virus, de particules de bactériophages et de flagelles bactériens présents dans les matières fécales.

L’utilisation de la technologie IEM permet dans certains cas non seulement d’augmenter le pourcentage de détection des rotavirus, mais également de prouver leur rôle étiologique. Pour l’étude IEM, 0,1 ml d’immun sérum d’animaux dilué à 1: 5 est mélangé à 0,4 ml d’extrait fécal à 10%. Le mélange est incubé pendant 1 heure à la température ambiante, puis pendant 12 heures à 4 ° C, après quoi il est centrifugé pendant 90 minutes. à 15 000 rpm Le surnageant est égoutté et le précipité résultant est remis en suspension dans quelques gouttes d'eau distillée, par opposition à une solution à 2% d'acide phosphorotungstique (pH 6,5) et placé sur des grilles d'objet; l'excès d'humidité est éliminé avec du papier filtre. L'étude des médicaments est réalisée au microscope électronique avec un grossissement instrumental de 50000x, en regardant au moins cinq cellules de la grille en question. En cas de résultat positif, les particules de rotavirus sont détectées dans des préparations sous forme d'agrégats spécifiques (complexes immuns).

6.3. Détection de l'antigène du rotavirus dans le matériel à tester

6.3.1. Obtenir des immunoréactifs

Les sérums hyperimmuns et les immunoglobulines spécifiques du rotavirus sont obtenus par immunisation de lapins, de cobayes et de poulets.

L'antigène à immuniser a été préparé comme suit: 5 ml de suspension de culture de rotavirus SA-II ont été traités avec de la trypsine, ajoutés à des matelas de 1,5 litre avec une monocouche de cellules hétéroploïdes du rein de singe vert 4647, incubés pendant 60 minutes à 37 ° C; Ajouter du milieu d'entretien sans sérum et incuber pendant 24 à 48 heures à 37 ° C. Toute la biomasse est soumise à une congélation ou une sonication par 3, ajoutez du PEG M 6000 à une concentration de 8 à 10%, laissez pendant 20 heures à 4 ° C, puis centrifugé à 10 000 tr / min. 2 heures Le culot est remis en suspension dans du PBS (1/30 à 1/50 du volume de biomasse). Après nettoyage au fréon 113, la phase aqueuse est utilisée pour immuniser les animaux et comme antigène dans les études immunologiques. Le concentré dans un volume de 1 ml contient au moins 10 particules virales.

Immunisation des lapins: les lapins reçoivent une injection de 2 ml de préparation de rotavirus par voie intraveineuse les jours 1, 7, 35, 42 et du sang est prélevé le jour 49 après le début de l’immunisation. Aux jours 1 et 35, l'antigène reçoit un adjuvant complet de Freund supplémentaire en plusieurs points du dos.

La fraction d'immunoglobuline est précipitée à partir de sérum de lapin hyperimmun avec une solution aqueuse à 10% de polyéthylène glycol (PEG) de poids moléculaire 6000. Le précipité est recueilli par centrifugation, dissous et dialysé contre un tampon 0,01 M de K-phosphate (pH - 7,4) à 0:01 M Nace ( FSB). La concentration en immunoglobulines déterminée par spectrophotométrie.

Immunisation des cobayes: on injecte à l'animal, par voie intramusculaire, 0,5 ml d'une préparation concentrée de rotavirus avec un volume égal d'adjuvant complet de Freund à 1,14 et au 28ème jour, et un prélèvement de sang deux semaines après la dernière immunisation.

Immunisation des poulets: Des poules pondeuses âgées de 20 semaines et issues d'hybrides de race blanche Leggorn "Zarya-17" sont immunisées par voie intraveineuse à 1, 14 et 28 jours. Au cours de la première immunisation, l'antigène est également administré par voie intramusculaire dans un mélange avec un volume égal d'adjuvant complet de Freund. La quantité maximale d'anticorps dans le jaune est observée après la troisième immunisation. Les poulets peuvent être utilisés de manière permanente après la réimmunisation.

Isolement des immunoglobulines de poulet: le jaune est séparé de la protéine dans la coque ou dans l'entonnoir de Büchner et lavé à l'eau du robinet. Le jaune (10 ml) est transféré dans un tube à centrifuger, ajouter un volume double (20 ml) de FSB et bien mélanger. Le PEG 6000 est appliqué à une concentration de 3,5% (poids / volume) et mélangé pendant 10 minutes. à 14000 g. Le surnageant est filtré à travers un papier filtre dans un cylindre gradué. Ajouter du PEG 6000 supplémentaire à une concentration finale de 12% et mélanger. Les immunoglobulines précipitées sont recueillies par centrifugation (10 min. 14 000). Le précipité est dissous dans 5 ml de FSB (1/2 volume de jaune). La concentration de protéines dans la préparation est généralement de 6 à 12 mg / ml.

6.3.2. Méthode de dosage immunoenzymatique (ELISA)

La méthode de dosage immunoenzymatique (ELISA), basée sur l'utilisation d'anticorps marqués avec une molécule enzymatique (peroxydase), est l'une des méthodes les plus courantes, efficaces et spécifiques de détection de l'antigène viral. Utilisez généralement les options "sandwich" directes et indirectes. Marqueur enzymatique détecté en réaction de couleur avec le substrat. La variante ELISA directe est plus rapide que la variante indirecte, mais elle est moins sensible et moins spécifique. Dans la formulation d'un variant indirect, un conjugué commercial anti-spécifique d'immunoglobulines avec une enzyme est utilisé; Pour prévenir les interactions non spécifiques entre le conjugué et les anticorps adsorbés sur le panel, il est nécessaire de disposer de sérums antiviraux de deux espèces animales différentes.

Variante ELISA indirecte: 0,1 ml d'immunoglobulines anti-thrombing provenant du jaune d'oeuf des œufs de poulets immunisés sont introduits dans la moitié (48) des puits. Dans l'autre moitié, les immunoglobulines d'œufs pondus avant l'immunisation sont introduits en tant que contrôle négatif. La sorption des immunoglobulines est réalisée à partir d'une solution à 5 µg / ml dans du PBS pendant une nuit à 4 ° C. Le contenu des puits est drainé, les puits sont lavés avec du PBS-T et 0,1 ml de l'échantillon test sont appliqués dans du PBS-T avec 1% de BSA et 0,01 M d'EDTA dans les puits avec l'antirotavirus et les immunoglobulines normales et incubés pendant 1 heure à 37 ° C.

Après lavage, 0,1 ml de sérum anti-rotavirus de lapin dilué à 1: 1000 - 1: 25000 est ajouté aux puits dans du tampon PBS-T. La dilution optimale du sérum est déterminée lors d'expériences prédéfinies. Les panneaux sont fermés et incubés pendant 2 heures à 37 ° C. Les puits sont lavés et 0,1 ml d'une préparation commerciale d'anticorps anti-IgG de lapin marqués à la peroxydase à une concentration de 1 à 2,5 µg / ml dans du contenu en peroxydase dans du PBSB-T-BSA est incubé pendant 1 heure à 37 ° C. Les puits sont lavés, ajoutez 0,1 ml de mélange de substrat fraîchement préparé (O-phénylène diamine 0,5 mg / ml dans un tampon au citrate de sodium 0,05 M, pH 5,0; HO - 0,03%. (Attention, nécessite du travail. soyez prudent!)) et incuber à la température ambiante dans le noir pendant 30 à 40 minutes. La réaction enzymatique est arrêtée par addition de 0,05 ml de H SO 3 M. Les résultats de la réaction sont pris en compte visuellement ou spectrophotométriquement. Les échantillons sont considérés comme positifs, dont la densité optique n’est pas inférieure à 2 fois la densité optique du contrôle négatif.

6.3.3. Méthode de coagglutination

Cette méthode est basée sur la capacité de la protéine A Staphylococcus aureus de la souche Cowan à se connecter au fragment Fc - de l’IgG et, lors de la formation d’un complexe antigène-anticorps spécifique, à provoquer le phénomène d’agglutination.

Pour la formulation de la réaction de coagglutination, on utilise un réactif sec commercial du staphylocoque contenant la protéine A (Institut de recherche en médecine électrochimique Pasteur, Leningrad), qui est réhydraté avant utilisation dans une solution à 0,1% de bleu de méthylène.

Auparavant, chaque série de sérum hyperimmun est testée pour la présence d'anticorps antistaphylococciques. Pour ce faire, mélanger sur une lame de verre des volumes égaux de sérum à une dilution de 1: 500 et 10% de suspension de staphylocoque. Tenez compte des résultats dans les 5 minutes qui suivent l’agglutinat en éducation. Pour le travail de sérums sélectionnés, qui ne contiennent pas d’anticorps antistaphylococciques à une dilution de 1: 500. Pour la préparation du diagnostic, on mélange 0,01 ml de sérum anti-ratavirus dilué à 1:10 avec du FSB avec 0,5 ml de suspension à 10% de staphylocoque, maintenue à la température ambiante pendant 1 heure, puis on ajoute 9,5 ml de FSB (diagnosticum). De la même manière, le staphylocoque est sensibilisé avec du sérum pré-immun (réactif de contrôle). Le réactif de diagnostic et de contrôle est utilisé dans la réaction de PKA et de TRKA.

Pour organiser le RCA dans les puits en forme de U du panneau, préparer 0,05 ml de PBS pH 7,4; Dans deux puits, préparer Takacchi microtitre ou distributeur 0,05 ml de suspension à 10% de matières fécales et préparer des dilutions en série au double, de 1: 2 à 1: 256. Ajoutez 0,05 ml de réactif dans les puits de la première rangée et 0,05 ml de réactif de contrôle dans les puits de la deuxième rangée. Les panneaux sont recouverts d'un couvercle et incubés dans un thermostat à 37 ° C - 3 heures. Dans chaque expérience, un échantillon d'une suspension de matières fécales positives et négatives pour le rotavirus, ainsi que des lysats de cellules infectées par le rotavirus SA-II, précédemment testés au microscope électronique.

Prise en compte de la réaction: les résultats sont considérés comme positifs lorsqu'un «parapluie» d'agglutination est détecté en même temps que le diagnostic, avec un résultat négatif ou une diminution de 4 fois du titre en parallèle avec le réactif de contrôle. Les résultats sont considérés comme négatifs lorsque des disques se forment dans les deux rangées parallèles. Afin d'éliminer la coagglutination non spécifique dans les rangées paires, la suspension de matières fécales est adsorbée avec un volume égal de sérum de lapin normal à 37 ° C pendant 2 heures, puis chauffé à 80 ° C pendant 45 minutes. Puis revivez la réaction de coagglutination.

6.3.4. Méthode de réaction en phase solide de la coagglutination (TRKA)

Cette méthode de détection des antigènes de rotavirus est basée sur les principes de la méthode de dosage immunologique en phase solide (voir 4.3.2). Cependant, contrairement à ce dernier, TRCA n'utilise pas l'enzyme comme marqueur, mais le réactif de diagnostic et de contrôle (voir 4.3.3).

Pour la mise en scène, TRKA utilise des panneaux immunologiques avec des puits en forme de U. Pour la sensibilisation, 0,1 ml de sérum hyperimmun dilué avec un tampon carbonate-bicarbonate 0,01 M (pH 9,6) à 1: 1000 est ajouté aux puits. Les sérums sont laissés 2 à 3 heures à 37 ° C. Les anticorps non liés à la phase solide sont éliminés par lavage à trois reprises pendant 3 minutes. FSBT. Après cela, préparer 0,05 ml des échantillons étudiés, ainsi que des échantillons manifestement positifs et négatifs (2 puits pour chaque échantillon) dans les puits et laisser pendant 2 heures à 37 ° C pour former des complexes antigène-anticorps. L'antigène non lié et les impuretés associées sont éliminés par triple lavage du PBS. Ajoutez ensuite dans un puits 0,05 ml de staphylocoque à 0,5%, dans le second (témoin) 0,05 ml de suspension à 0,5% de staphylocoque sensibilisée avec du sérum pré-immun (voir 4.4.3). L'incubation est effectuée soit pendant 1 à 2 heures à 37 ° C, puis pendant 1 à 3 heures à 4 ° C, ou entre 18 et 24 heures à 4 ° C. Le résultat de la réaction d'agglutination est pris en compte visuellement: en cas de réaction positive, les bactéries agglutinées forment un parapluie; avec une réaction négative - les bactéries se déposent complètement sous la forme d'un disque.

6.3.5. Méthode d'hémagglutination indirecte

Dans cette méthode, la détection de l’antigène de rotavirus est basée sur l’utilisation d’un anticorps diagnostique des érythrocytes, qui est un érythrocyte de mouton sensibilisé par le liquide d’immunoglobuline ascite de rats blancs immunisés avec le rotavirus SA-II.

Des dilutions de deux fois de suspension fécale à 10% dans les puits du panel sont testées avec un diagnostic des érythrocytes. L'agglutination des érythrocytes diagnostiques indique la présence d'antigène de rotavirus dans l'échantillon. Une description détaillée de la procédure de formulation du PHA figure dans les instructions jointes au kit de préparation (Association de production scientifique "Rostepidkompleks", Rostov-on-Don).

Le kit Rotatest est basé sur l’hémagglutination passive inverse et est conçu pour détecter les rotavirus dans les fèces et pour détecter les anticorps anti-rotavirus dans les sérums sanguins.

6.3.6. Méthode de détection immunocytochimique du rotavirus

La méthode repose sur la détermination immunochimique de l'antigène viral synthétisé dans les cellules à la suite de leur infection par un matériel contenant un virus.

L'avantage de la méthode par rapport à l'ELISA réside dans une sensibilité plus élevée, ainsi que dans la possibilité de déterminer et de quantifier l'infectivité de l'échantillon à tester.

Stade de l'expérience: les cellules transplantées du rein d'un singe vert à une concentration de 3 à 10 cellules / ml préparent 0,2 ml dans les puits de panneaux à fond plat et incubent à 37 ° C (24 à 48 heures). Les cellules sont ensuite lavées avec du milieu Eagle-MEM. Le matériau à tester est dilué dans du milieu Eagle-MEM, activé pendant 1 heure à 37 ° C en présence de 10 μg / ml de trypsine et ajouté dans 0,1 ml dans au moins 4 puits. Les contrôles positifs sont les puits dans lesquels le matériel contenant du rotavirus a été inséré. Contrôles négatifs: puits à cellules non infectées et puits dans lesquels du matériel similaire au test est introduit, mais ne contenant pas de rotavirus. L'adsorption est réalisée pendant 1 heure à 37 ° C, puis le milieu est éliminé, les cellules sont lavées avec du milieu Eagle-MEM. Ajouter 0,2 ml de milieu Eagle-MEM avec 1 µg / ml de trypsine dans les puits et incuber pendant 48 heures à 37 ° C.

Les cellules sont lavées deux fois avec une solution saline et fixées avec 85% d'acétone froid (-20 °), incubées pendant 2 heures à -20 ° C, puis l'acétone est éliminée. Le panneau est lavé 3 fois avec du PBS contenant 0,05% de Tween 20 (PBS-T). On ajoute aux puits 0,1 ml de sérum antirotavirus antirotavirus antirabique antirabique résistant au PBS-T. Incuber pendant 2 heures à 37 ° C. Après lavage du panel, 0,1 ml d'un anticorps anti-IgG de lapin marqué à la peroxydase (préparation commerciale) est ajouté dans les puits d'un puits, à une concentration de 2 µg / ml, par la teneur en peroxydase dans du PBS à 1% de BSA et incubée pendant 1,5 heure à 37 ° C. C.

Le panneau est lavé 2 fois avec du PBS-T et 1 fois avec du tampon acétate 0,05 M, pH 5,0. 0,1 ml d'une solution fraîchement préparée de substrat de peroxydase contenant 10 ml de tampon acétate / 4 mg de 3-amino-9-éthylcarbazole (AEC) dissous dans 0,5 ml d'acétone et 0,01 ml d'eau oxygénée à 33% sont ajoutés aux puits. (Attention! Travailler avec AEC nécessite de la prudence). Incuber pendant 30 à 40 minutes. dans l'obscurité à la température ambiante. La réaction est arrêtée en lavant le panneau avec de l'eau distillée.

La réaction est comptabilisée au microscope optique avec un faible grossissement. Les puits de contrôle négatif ne doivent pas contenir de cellules colorées. Les amas locaux de cellules colorées sont des foyers d'infection virale.

6.3.7. Méthode d'immunofluorescence

Pour identifier l’antigène de rotavirus par immunofluorescence, on utilise une lignée cellulaire 4647. Les cellules sont cultivées sur des lamelles couvre-objets ou des lames enfermées dans des flacons ou des tubes de pénicilline. La culture infectée est incubée à 37 ° C pendant 24 à 48 heures, après quoi les verres sont retirés des flacons, lavés avec une solution saline à 0,15 M avec addition de tampon phosphate à pH 7,2, rincés à l'eau distillée et séchés à l'air. Ensuite, les préparations sont fixées en deux équipes (10 minutes chacune) d'acétone chimiquement pure refroidie à 4 ° C.

Les préparations sont traitées par une méthode indirecte dans une chambre humide. Une goutte de sérum de lapin immun rotavirus est appliquée sur les cellules de culture et incubée pendant 30 minutes. à 37 ° C, les médicaments sont lavés trois fois au FSB et éliminent l'excès d'humidité. Les préparations humides sont colorées avec un mélange de volumes égaux de conjugué anti-FITC et d'albumine bovine, marquées à la rhodamine, et incubées pendant 30 minutes. à 37 ° C Après 3 lavages au FSB, les préparations sont séchées à l'air. Afin d'éliminer la fluorescence non spécifique, le sérum antiviral est adsorbé avant utilisation avec un homogénat de culture cellulaire normale et le conjugué FITC est traité avec du charbon actif selon les méthodes standard.

Les contrôles suivants sont utilisés comme contrôles obligatoires: préparations de cultures non infectées traitées de la même manière et préparations de cultures infectées traitées au premier stade du sérum antiviral normal et hétérologue de la même espèce que le sérum immun contre le rotavirus.

Dans le cas de résultats positifs, une fluorescence vert vif distincte est observée dans le cytoplasme des cellules.

6.4. Méthode d'électrophorotypage des rotavirus

La méthode est basée sur l'identification de rotavirus par électrophorèse sur gel de polyacrylamide de segments d'ARN génomique viral. La méthode permet la différenciation des souches de rotavirus sur la base des différences de mobilité électrophorétique de segments d'ARN individuels d'isolats différents et est donc largement utilisée dans les études épidémiologiques. La méthode ne nécessite pas de pré-culture d'isolats, a une sensibilité élevée et une spécificité absolue.

La méthode est particulièrement intéressante pour les épidémiologistes lorsqu’il s’agit d’étudier des maladies collectives d’épidémies de rotavirus.

Il peut être effectué sur la base de laboratoires équipés d'appareils d'électrophorèse.

Pour l'analyse, 0,2 à 0,5 ml d'une suspension fécale à 10 à 20% est suffisant. Les suspensions sont traitées avec du fréon 113 et incubées avec de la pronase (0,2 mg / ml, 15 minutes) en présence de dodécylsulfate de sodium (1%) et d'éthylènediaminetétraacétate de sodium (0,001 M). Après avoir ajouté de l'acétate de sodium (0,3 M), l'ARN est déprotéinisé avec un mélange de phénol: alcool chloroforme-isoamylique et précipité avec 2,5 volumes d'éthanol (18 heures à -20 ° C ou 2 heures à -70 ° C). Le précipité est recueilli par centrifugation, dissous dans de l'eau et un tampon de dissociation est ajouté. L'électrophorèse est réalisée selon la méthode de Laemmli dans des plaques de gel à 10%. Le nitrate d'argent (0,011 M) est généralement utilisé pour colorer l'ARN dans un gel. Après la procédure de manifestation dans le gel, 11 bandes d'ARN sont visibles, correspondant au segment génomique du rotavirus.

6.5 Détermination de l'immunoglobuline de classe M dans le sérum

un patient infecté par le rotavirus par la méthode en phase solide

réactions de coagglutination (TRCA)

Dans ce cas, le principe de la réaction de coagglutination en phase solide (voir 4.3.4) est utilisé: pour la sensibilisation des puits du panel, utiliser 0,1 ml de sérum monospécifique d'agneau du commerce contre l'IgM humaine, à une dilution de 1: 1000. Les panneaux sont incubés pendant 2-4 heures à 37 ° C. Les puits sont ensuite lavés avec du FSBT, remplis avec une solution de gélatine à 3% et laissés pendant 30 minutes à 37 ° C. Les puits ont lavé la FSBT et constitué 0,05 ml de sérum étudié, ainsi que de sérums délibérément positifs et négatifs, dilués à 1: 100 FSBT (2 trous pour chaque sérum). Lors de la détermination du titre en anticorps, les doubles dilutions des échantillons testés sont examinées (1:10 - 1: 1280). Les panneaux sont incubés pendant 2 heures à 37 ° C et, après lavage, 0,05 ml de réactif de diagnostic et de contrôle sont introduits dans les puits appariés. La réaction est prise en compte après 1 à 2 heures (voir ci-dessus, 4.3.4).

Le même principe, modifié par TRCA, est utilisé pour tester l'infection à rotavirus par les anticorps IgA et IgG, ainsi que pour l'analyse du colostrum et du lait pour les lactoglobulines.

La méthode de détermination de l'immunoglobuline de classe M dans le sérum du patient est utilisée à la fois pour le diagnostic précoce des formes manifestes et leur diagnostic différentiel avec les formes asymptomatiques de l'infection à rotavirus.

7. Mesures anti-épidémiques

Chaque cas d'infection intestinale aiguë causée par des rotavirus, en particulier les enfants de moins d'un an, ainsi que les enfants fréquentant des établissements préscolaires, nécessite une analyse épidémiologique minutieuse afin d'identifier la source, les principaux modes et facteurs de transmission afin de mettre en œuvre en temps utile des mesures anti-épidémiques. dans l'épidémie.

Mesures visant à identifier et à neutraliser la source d'infection. La détection des patients suspects de la maladie est effectuée par les médecins de tous les établissements de santé: lors de visites ambulatoires, de visites à domicile, d'examens médicaux d'enfants en institutions, hôpitaux, etc. Les patients identifiés sont isolés des groupes d'enfants. L'observation médicale et le traitement des patients peuvent être effectués à domicile ou à l'hôpital. Les enfants qui fréquentent des établissements pour enfants qui sortent de l'hôpital ou qui ont terminé un traitement à domicile avec des tests de laboratoire négatifs sont admis dans des groupes d'enfants sur la base d'un certificat de pédiatre. Les enfants qui ont eu un GT et continuent à excréter des rotavirus (ou un antigène de rotavirus) avec des matières fécales sans manifestation clinique d'infection peuvent être admis dans les jardins d'enfants et les groupes de jardins d'enfants des jardins d'enfants / jardins d'enfants soumis à une surveillance médicale continue et à des examens de laboratoire répétés 2 à 3 semaines plus tard. dès l'apparition de la maladie ou de l'isolement du virus.

L’examen épidémiologique des foyers familiaux des patients atteints de FG porte sur la maladie des enfants de moins de 2 ans et des adultes à partir du nombre de contingents décernés. L’épidémiologiste se rend dans l’établissement pour enfants avec une enquête sur les cas répétés de gastro-entérite non bactérienne.

L'observation médicale des enfants en communication avec les patients est effectuée dans les cinq jours suivant la date d'isolement du dernier malade.

Les tests de laboratoire pour les rotavirus (antigènes) des enfants et des adultes qui ont communiqué avec les patients, tant au sein de la famille qu'au sein de groupes organisés, sont effectués sur les instructions de l'infectiologue et de l'épidémiologiste, le cas échéant (apparition dans la famille ou l'équipe de nourrissons OKI avec une clinique similaire), violation flagrante du régime sanitaire et hygiénique, présence dans le foyer de travailleurs d'entreprises de produits alimentaires et de personnes assimilées à ceux-ci, etc.). L'examen de laboratoire obligatoire est soumis à la mère d'un enfant malade au cours de sa première année de vie. Les personnes chez lesquelles des rotavirus (antigènes) sont présents dans les matières fécales sont soumises à un examen clinique approfondi par un spécialiste des maladies infectieuses. En l'absence de manifestations cliniques de la maladie, les enfants et les employés de l'équipe ne sont pas isolés.

Employés des entreprises alimentaires, des services d'eau, etc. au moment de l'examen de re-laboratoire et de la surveillance médicale sont utilisés dans l'établissement. Des examens de laboratoire répétés sur des personnes excrétant des rotavirus (antigène) avec des matières fécales sont effectués conformément aux prescriptions de l'infectiologue et de l'épidémiologiste, à un intervalle de 5 à 7 jours, au moyen d'un examen de laboratoire complet.

Si des maladies de groupe surviennent dans des établissements pour enfants, des mesures de quarantaine sont appliquées dans les 5 jours suivant l'isolement du dernier patient.

Les institutions mènent régulièrement des travaux sanitaires et éducatifs visant à prévenir l'infection à rotavirus.

Mesures visant à briser le mécanisme de transmission de l'infection.

Des études ont démontré un effet néfaste sur les rotavirus à +70 ° C après 15 minutes; lorsqu'ils sont exposés au rayonnement ultraviolet, les rotavirus sont également inactivés après 15 min.

En ce qui concerne leur résistance à l'action des désinfectants largement utilisés, les rotavirus sont proches des entérovirus et de l'hépatite A. Par conséquent, dans les centres d'infection à rotavirus et dans les hôpitaux où il y a des patients, il est conseillé de procéder à des mesures de désinfection selon le schéma thérapeutique et en utilisant les moyens recommandés pour le traitement de l'hépatite virale A et infections à entérovirus (Ordonnance du Ministère de la santé de l'URSS nº 752 du 07/08/81 et Ordonnance du Ministère de la santé de l'URSS nº 916 du 08/04/83). Une attention particulière doit être portée sur la manipulation correcte des mains des personnes qui servent les enfants, ainsi que sur les mamelons, les jouets, la vaisselle et autres objets servant aux soins des patients.

Une irradiation ultraviolette régulière est recommandée. Le rayonnement ultraviolet est généralement effectué à l'aide d'irradiateurs - OBN-150 sur 30 mètres cubes. m chambres, OBP-300 60 cu. m chambres et autres. Les aliments non blindés sont réglés au taux de 1 - 1,5 W par 1 cu. m pièces en l'absence de personnes (afin d'éviter d'endommager les yeux muqueux), blindé - à un taux de 2 - 2,5 W par 1 cu. m, l'irradiation peut être effectuée en présence de personnes. Temps de désinfection - 30 à 40 minutes. L'irradiation de l'air doit être effectuée après le nettoyage de la pièce, le changement du linge de lit et tout autre travail lié à la formation de poussière en aérosol.

Dans les services spécialisés de l'hôpital, le personnel doit porter un masque respiratoire.

L’organisation des mesures sanitaires et hygiéniques destinées à prévenir l’infection à rotavirus est réalisée conformément aux instructions et recommandations en vigueur pour les autres infections par le mécanisme fécal-oral de propagation du pathogène.

L'une des mesures efficaces pour prévenir l'infection à rotavirus chez les nouveau-nés est leur allaitement.

La prévention spécifique de l'infection à rotavirus n'est pas effectuée.